Самая большая православная святыня Волыни, вторая, после Киево-Печерской лавры. Один из форпостов «русского мира». Долгое время «охранялся» «казаками».
По легенде в XIX в, монастырь основали монахи Киево-Печерского монастыря, бежавшие от нападения татар в 1240 году. Впервые упоминается в документах в 1527.
Когда в 1596 Коронная власть провозгласила церковную унию, монастырь решительно выступает против окатоличивания православных, стойко выдерживая натиск чужих вероучений, становится мощным духовным центром Православия. В 1597 г. Украинский шляхтянка Анна Гойская подарила монастырю чудотворную икону Матери Божьей, которую привез на Волынь 1559 греческий митрополит Неофит. Расцвет монастыря связан с дияльнистюигумена Иова Железа (1550-1651 г.), Который преобразил обитель - ввел общинную жизнь монахов, окружил обитель стеной, создал типографию для защиты православия. В 1649 средства Федора и Евы Домашевских возведен каменный храм в монастыре. Одна из святынь - Почаевская икона Божьей Матери; в 1675 благодаря молитве к этой иконе турецко-татарские завоеватели отступили от монастыря (событию посвящена дума «Ой, взошла заря вечеровая»).
В 1713 монастырь стал греко-католическим, Ордена Святого Василия Великого (Ордена, василианские).
Состояние сооружений монастыря требовало реконструкции. После многочисленных совещаний для перестройки монастыря был принят проект Яна Готфрида Гофмана. 20 февраля 1771 Ян Готфрид Гофман заключил контракт на строительство нового храма. 3 июля 1771 был торжественно заложен первый (краеугольный) камень. В 1791 году закончили строительство монастыря и 8 сентября образ был торжественно внесен в новую святыню. 8 сентября 1773 в. Сильвестром Рудницким (после признания чудотворной Папой Римским Климентом XIV) была коронована икона Богоматери в деревянной часовне, возведенной по проекту архитектора, каменецкого коменданта Яна де Витте.
С 1713 к 1832 года Почаевский монастырь был греко-католическим, принадлежал Василианскому Ордену.
С 1730 в Лавре года действовала Почаевская типография, из которой вышло 187 книг, среди которых «Богогласник» (1790-91) - крупнейшая сборник духовных кантов.
В 1807-1810 годах Долинский Лука оформлял интерьер Успенской церкви Почаевского монастыря: иконы для иконостаса, больших и боковых алтарей, росписи «Чудес Христовых» на пилястрах, настенная живопись, связанный с историей монастыря (заменена по указанию царя Александра II 1861 года).
Во время благородного ноябрьского восстания 1830-1831 годов монахи благосклонно отнеслись к антимосковским повстанцам: помогли провиантом, лошадьми, фуражом, деньгами; 9 монахов-василиан, 45 монастырских подданных присоединились к благородному войску.
25 октября 1831 монастырь был возвращен в ведение православного духовенства. В 1833 году обитель получила статус «лавры» с присвоением четвертого места в числе существующих в Российской империи.
Монастырь стал оплотом русификации региона, после указа Николая II 1905 - центром деятельности черной сотни. В частности, здесь печатали антиукраинской «Почаевский листок» - «представитель» «САЮЗ русскаго народа».
Во время Первой мировой войны 1914-1918 годов из Лавры вывозилось все, что представляло хоть какую-то ценность: от колоколов до архива, библиотеки, свечного завода. Чудотворный Почаевский образ Божией Матери, мощи преподобного Иова в серебряной раке были доставлены в Житомир (пробыли до 1918 года). Большая часть братии была эвакуирована в Святогорской пустыни Харьковской епархии. В Почаевской обители пожелали остаться 18 человек; представители австро-венгерской армии, занявшие монастырь в августе 1915 года, отправили их в Венгрию в лагерь пленных, обитель обобрали насколько было возможно. В мае 1916 года, в результате Брусиловского наступления в Галиции, в Почаев входят российские войска. В Лавре восстанавливается православное богослужение, возвращаются иконы, начинает налаживаться хозяйственная жизнь обители.
Во время национально-освободительной борьбы вокруг Лавры не затихали бои. Насельники спрятали большинство из святынь Лавры, сами трудились, имея лишь скудные запасы. В начале 1919 года Лавра была захвачена большевиками: разграбили то последнее имущество, оставалось, кровопролития не было.
8 сентября 1920 земли Волыни, в частности Почаев и окрестности, были оккупированы поляками, и официально вошли в состав Польской республики. До 1939 года монастырь принадлежал Польше, входил в состав Польской православной церкви.
В 1939 после присоединения западных регионов Украины в СССР лавра вошла в молитвенное общение с Русской церковью.
Во время гитлеровской оккупации в ходе Второй мировой войны Лавра принадлежала к канонической Украинской автономной православной церкви, сохранила общения с Московской Патриархией. В советский период была лишена многих угодий и возможностей но Лавра продолжала быть опорой Православия. В 1960 Лавра выдержала новую волну антирелигиозных гонений, не была закрыта. В последующие десятилетия советского режима власти вновь неоднократно пытались закрыть монастырь.
С распадом СССР давление атеистической власти ослаб, Лавра смогла расширить свою деятельность - открылся лаврский Свято-Духовский скит, в городе Кременец Лавре было возвращено здание музея, с 1991 года возобновились лаврские образовательные учреждения - пастырские курсы, духовное училище - с 1994 года как духовная семинария.
Почаевская лавра - одно из мест паломничества на 5 августа - Почаевской Божьей матери, 28 августа - Успение Пресвятой Богородицы и 10 сентября - преподобного Йова
К святыням относятся: след стопы Матери Божьей с источником целебной воды, ее чудотворная икона, мощи преподобных Иова и Амфилохия, который лечил повстанцев УПА Амфилохий Почаевский - святой УПЦ МП, который помогал подполью УПА.